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BioRadpcr仪售后维修电话.Bio-Rad梯度PCR仪

2018-04-08 23:28    
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北京(伯乐)Bio-Radpcr仪售后维修服务 / 6693

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Bio-Radpcr仪反应体系与反应条件  标准的PCR反应体系:  10×扩增缓冲液   10ul  4种dNTP混合物   各200umol/L  引物        各10~100pmol  模板DNA       0.1~2ug  Taq DNA聚合酶   2.5u  Mg2+       1.5mmol/L  加双或三蒸水至   100ul  PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+  引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。
理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
     设计引物应遵循以下原则:  
     ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
   ②引物扩增跨度: 以bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
   ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC较好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
   ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
   ⑤引物3’端的碱基,特别是较末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
   ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列较好有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
   ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

 dNTP的质量与浓度 dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系,dNTP粉呈颗粒状,如保存不当易变性失去生物学活性。
 dNTP溶液呈酸性,使用时应配成高浓度后,以1M NaOH或1M Tris。
 HCL的缓冲液将其PH调节到7.0~7.5,小量分装, -20冰冻保存。
 多次冻融会使dNTP降解。
 在PCR反应中,dNTP应为50~200umol/L,尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制),如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低),就会引起错配。
 浓度过低又会降低PCR产物的产量。
 dNTP能与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度降低。

每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

Bio-Radpcr仪荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。
 现将其原理简述如下:
 荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
 探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5-3外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

Bio-Radpcr仪公司各部门实行岗位责任制、奖罚责任制、绩效考核制,每位员工统一服装,统一工作牌。真正做到公司及合作厂家的形象化、制度化、网络化、信息化;真正让每位用户享受到真诚、优质、高效、便捷的贴心服务。

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